Анализ на герпесную инфекцию: виды тестов в диагностике

Вирус простого герпеса чрезвычайно распространен во всем мире, и ежегодно фиксируется рост заболеваемости. Причина состоит в том, что большинство случаев инфицирования протекают без симптомов. Передача инфекции чаще всего происходит в периоды бессимптомной вирусной нагрузки. Симптоматически герпес может выражаться в нетипичных высыпаниях, потому помимо осмотра у дерматолога нужно сдать анализ на герпес:

• выявление вируса в области половых органов или в экссудате сыпи;
• определение в крови антигенов.

В некоторых лабораториях применяются молекулярно-серологические методы, проверяющие кровь на манифестирующий герпес, если другие тесты показывают отрицательные результаты. Они также способны определить длительность нахождения инфекции в организме.

Как сдается анализ?

Образцы из пузырьковых высыпаний должны быть взяты на протяжении первых трех дней после появления. При возникновении корочек концентрация вируса падает. Употребление алкоголя способно инактивировать вирус, сделать анализ ложным. Тампоны с альгинатом кальция также уничтожают герпес.

Анализы на герпес проводятся двумя методами:

• при прямой диагностике пузырек прокалывается стерильной иглой, после чего лавсановым тампоном собираются вирусные частицы из очага инфекции;
• при непрямой проводится взятие 8-10 мл крови в пробирку.

Исследование вирусных частиц

Прямые тесты подтверждают наличие вируса на участках сыпи или в половых выделениях. Идеальный образец берется из пузырька, который появился не позднее, чем 24 часа назад. При множественной сыпи заборы делают в нескольких местах.

Вирусологический метод считается «золотым стандартом» диагностики, но его чувствительность зависит от стадии поражения во время сбора образцов.

Чувствительность также составляет 75% во время первого эпизода сыпи и 50% при рецидиве. Сданный материал засевают в питательную среду, которая состоит из фибробластов крайней плоти, куриных эмбрионов или почек кролика. Культура исследуется спустя 7-10 дней.

С помощью центрифуги время созревания вирусных культур сокращается до 16-48 часов, но также снижается чувствительность метода.

Метод окрашивания специфических антител заключается в стимуляции синтеза галактозидазы, из-за которой зараженные клетки светятся синим цветом. После применения иммунофлуоресценции клетки рассматриваются под микроскопом. Область применения данного метода широка:

• выбор противовирусного препарата;
• оценка эффективности терапии.

Результаты попадают к врачу на руки через двое суток.

Анализ на атипичный герпес или в случаях спорных дополняется биологической пробой: белых лабораторных мышей заражают инфицированным материалом для оценки активности вируса.

Исследование под микроскопом

Для забора и изучения материала делается соскоб с инфицированной кожи или слизистых оболочек.

Цитология предполагает оценку клеточной морфологии и стадию развития инфекции. По форме и количеству ядер в клетках определяют тип клеточных повреждений. Для простого герпеса характерны гигантские многоядерные клетки Тцанка. Именно так можно отличить хроническую рецидивирующую инфекцию. По наличию внутриядерных включений судят о повторных поражениях.

Данный метод является быстрым и доступным, поскольку результаты могут быть получены спустя три часа.

Электронный микроскоп также ускоряет диагностику, но точность зависит от количества вируса в образце. Если концентрация ниже чем 1 на 10 в 6 степени частиц на 1 мл, то требуется центрифугирование. Под электронным микроскопом нельзя отличить простой герпес от ветряной оспы. Результат может быть получен за три часа, но метод считается трудоемким и дорогостоящим.

ДНК-диагностика вирусов

К новым методам определения герпесвирусной инфекции являются гибридизация и полимеразная цепная реакция.

При гибридизации ДНК проводится определение вирусного генома после его связывания с маркированной молекулой. Однако метод применяется редко из-за долгого ожидания результата — от пяти до семи суток. При малой вирусной нагрузке в образце результаты получаются ложноотрицательными.

Полимеразная цепная реакция подразумевает создание множественных копий фрагмента ДНК с использованием фермента ДНК-полимеразы.

Для диагностики выбирается ген, отличающий герпесвирус от других.

Метод может определить присутствие вируса, дать информацию о количестве вирусных копий или количественное выражение вирусной нагрузки. Чтобы отслеживать динамику по одному результату анализа, сдавать материал на ПЦР-диагностику нужно в одной лаборатории.

Существует возможность искажения результата:

• ложноотрицательные получаются при нарушении технологии или применении реактивов низкого качества;
• ложноположительные — при подсчете копий ДНК открытыми методиками.

Существует более точная методика ПЦР, при которой копии ДНК подсчитываются по мере прохождения циклов, а не по итогу процесса.

Отличить скрытую инфекцию от реактивированной помогает метод обратной транскрипции для подсчета м-РНК вируса — показателя, оценивающего активность выражения вирусных генов.

Для высокоточной ПЦР-диагностики достаточно одной молекулы ДНК, а результаты будут готовы спустя шесть часов. Именно ПЦР устанавливает связь между уровнем активности вируса и тяжестью проявлений инфекционного процесса.

Определение антигенов

Иммунофлуоресценции нужна для определения антигенов вируса. Для проведения анализа иммуноглобулины помечаются красителями, которые дают зеленое или кранное свечение. Метод исключает ложноположительные и ложноотрицательные результаты ПЦР.

Серологические методы

Сдавать кровь на герпес нужно для обнаружения иммуноглобулинов IgM и IgG к вирусу:

1. При выявлении IgM говорят об остром процессе, хотя специфические иммуноглобулины появляются спустя 7-14 дней после заражения и находятся в крови до 1-3 месяцев. Иногда клетки сохраняются дольше, что искажает картину течения инфекции.
2. Антитела вторичного иммунного ответа IgG обнаруживаются в крови при дальнейшем развитии инфекции, говорят о скрытом и хроническом инфицировании, а также реактивации герпеса.

Комбинирование ПЦР и серологической диагностики дает оценку работе иммунитета.

Высокие цифры ПЦР при слабой выраженности антител означают низкий гуморальный иммунитет, на основании чего назначают препараты иммуноглобулинов или стимуляцию выработки антител.

Проводить оценку иммунитета нужно обязательно при рецидивах вируса, так как он подавляет иммунитет зараженного организма. Серологический метод выявляет дефицит иммунного ответа и показывает эффективность медикаментозной терапии герпеса.

Информация для женщин

Женщинам нужно знать, где и как провериться на герпес при планировании беременности. Расшифровать лабораторные анализы должен дерматолог. В результатах напротив типа специфических иммуноглобулинов стоит «плюс», означающий положительный результат или обнаружение, а также «минус» — частиц не обнаружено, что важно для выявления стадии инфицирования:

• при отсутствии IgM и присутствии IgG к предранним белкам и поздним белкам говорят об острой стадии инфекции или рецидиве;
• при отсутствии IgM и IgG к предранним белкам, но наличии IgG к поздним говорят о вирусоносительстве;
• присутствие IgM и IgG к предранним белкам без выявления антител к поздним белкам указывает на первичное острое заражение;
• наличие IgM, IgG к предранним и поздним белкам говорит о первичном заражении;
• отсутствие всех типов антител говорит, что инфекции нет.

Кровь на простой герпес можно сдать беременным женщинам, чтобы выявить IgG-антитела, которые указывают на защищенность плода.

Чтобы поставить диагноз о герпетической инфекции, анализы сдают и лабораторные исследования проводятся в следующей последовательности:

1. Результат инфицирования подтверждается обнаруженными вирусными частицами в экссудате, мазках, соскобах, слюне и крови с помощью экспресс-методов ПЦР или иммунофлуоресценции.
2. При получении спорных результатов назначается цитологическая диагностика, направленная на исследование клеток Тцанка.
3. Если подозревается первичный герпес, требуется анализ крови на специфические антитела в крови.

Диагноз ставится только при наличии клинических симптомов герпетического поражения — пузырьковой сыпи.

Лабораторные анализы помогают назначить и скорректировать противовирусную терапию. Анализ на антитела к вирусу герпеса оценивает активность специфического иммунитета. Проверка требуется при частых рецидивах герпеса, плохо поддающихся лечению ацикловиром штаммам, осложнениях.